Le secteur western-blot/immunohistologie du laboratoire NGERE est réparti sur 5 pièces techniques permettant l’immuno-détection de protéines. Pour mener à bien ses expérimentations, le laboratoire dispose de divers équipements :
Equipements de Western-blot
Le western-blot est une méthode semi-quantitative de biologie moléculaire permettant de détecter et d’identifier une protéine dans un mélange complexe (tissus, culture cellulaire, sérum…) grâce à des anticorps spécifiquement dirigés contre la protéine recherchée. L’anticorps est couplé à l’enzyme HRP et permet ainsi de détecter la présence de cette protéine par émission de chimiluminescence.
- Appareils d’électrophorèse (PowerPacTM Basic, Biorad)
Séparent les protéines en fonction de leurs poids moléculaires, dans un gel de polyacrylamide, grâce à un courant électrique contrôlé. - Trans-blot (Trans-Blot TurboTM System, Biorad)
Transfert rapide des protéines du gel sur une membrane - Détecteur Fusion (Fx7, Vilber)
Détecte la chimiluminescence émise par la réaction enzymatique de la HRP couplé à l’anticorps afin de révéler la présence de la protéine
Système d’électrophorèse capillaire automatisée Wes (Proteinsimple, Bio-Techne)
Il s’agit d’un système d’électrophorèse capillaire automatisée couplée à une détection chimiluminescente par immunomarquage des protéines. Cet appareil de haute technologie permet de séparer et d’analyser des protéines plus rapidement, avec une moindre quantité (< 1 µg) et avec une meilleure sensibilité et reproductibilité que le western-blot classique
Microscopes dédiés aux analyses Immunocytochimie/immunohistochimie (IHC/IF)
L’immunochimie est une méthode permettant de détecter et localiser une protéine sur une coupe de tissu ou sur une culture cellulaire grâce à des anticorps spécifiquement dirigés contre cette protéine recherchée. L’anticorps est couplé à un fluorochrome qui émet des photons à une longueur d’onde précise lors de l’observation au microscope à fluorescence.
- Cryostat HM560 Microm
Permet de réaliser des coupes fines de tissus à froid - Microtome HM325 Microm
Permet de réaliser des coupes fines (5-10 µm) de tissus inclus dans de la paraffine - Microscope à fluorescence BX51WIF, Olympus :
Permet de faire des observations rapides de coupes immunomarquées et de localiser la protéine d’intérêt en excitant les fluorochromes grâce à une source lumineuse (Mercure) et des filtres spécifiques (DAPI, FITC, TRITC). Ce microscope est associé à un logiciel permettant la capture et l’exploitation d’images. - Microscope confocal C2, Nikon : Permet de faire des observations très précises de coupes immunomarquées et de localiser précisément, grâce à une focalisation des photons et un déplacement pas à pas dans l’axe z, les protéines d’intérêt en excitant les fluorochromes via des sources lumineuses (Lasers 405, 488 et 543nm). Ce microscope est associé à un logiciel permettant la capture et l’exploitation
- Microscope lumière blanche : Permet l’observation de coupes histologiques immunomarquées (DAB) ou colorées de manière spécifique (HES, Trichrome Masson, etc.)
EQUIPEMENTS
